022 - L’Histone Acétyltransférase Tip60 régule l’activité biologique du facteur de transcription E2F1 - 05/12/08

Introduction : E2F1 est un facteur de transcription qui joue un rôle clé dans la progression du cycle cellulaire mais aussi dans l’apoptose. Nous avons décrit la dérégulation de son expression dans les cancers du poumon suggérant un rôle important de cette protéine lors de la carcinogénèse bronchique. L’acétylation est une modification épigénétique réversible des résidus lysines des protéines, qui émerge comme un nouveau système de signalisation contrôlant la croissance cellulaire. Nous avons récemment mis en évidence le rôle clé de l’histone acétyltransférase (HAT) Tip60 dans la réponse aux dommages de l’ADN induite par les carcinogènes du tabac <sup>[1Mol. Cell. Biol., 2006, 26 : 4339-50

Cliquez ici pour aller à la section Références]</sup>. Il est connu que E2F1 est impliqué dans la réponse aux dommages de l’ADN et que son activité biologique est régulée par acétylation. Ces données nous ont conduits à émettre l’hypothèse que E2F1 pourrait être une cible de Tip60.

Méthodes : L’acétylation de E2F1 a été analysée in vitro par un test HAT utilisant des protéines recombinantes et de l’Acétyl-CoA radiomarqué, et in vivo par immunoprécipitation et immunodétection avec un anticorps anti-lysine acétylée. L’interaction entre E2F1 et Tip60 a été étudiée in vitro par GST pull down et in vivo par co-immunoprécipitation sur des cellules co-transfectées. L’activité transcriptionnelle de E2F1 a été analysée dans des expériences de co-transfection à l’aide d’un vecteur reporteur codant pour le gène de la luciférase sous le contrôle du promoteur de la Cycline E.

Résultats : Nous montrons l’interaction entre Tip60 et E2F1 in vivo et mettons en évidence par des techniques in vitro que cette liaison est directe et implique les acides aminés 191 à 284 de E2F1 comprenant notamment son domaine de dimérisation avec son co- facteur DP1. Nous montrons aussi que la protéine E2F1 est acétylée par Tip60 in vitro et in vivo. Nos résultats in vitro indiquent que cette acétylation s’effectue au niveau des lysines 120 et 125 jouxtant son domaine de liaison à l’ADN. De façon intéressante, nous démontrons également la capacité de Tip60 à inhiber l’activité transcriptionnelle de E2F1.

Conclusions : Ces résultats dentifient E2F1 comme une nouvelle cible directe de Tip60 et suggèrent que la régulation des fonctions de E2F1 par Tip60 pourrait contribuer à l’activation des voies de réponse aux dommages de l’ADN induite par les carcinogènes du tabac.