026 - Impact de l’expression d’un inhibiteur de protéases, le TFPI-2, dans le micro- environnement tumoral pulmonaire - 05/12/08

Introduction : Le TFPI-2 (tissue factor pathway inhibitor 2) est un inhibiteur de protéases à sérine majoritairement secrété vers la matrice extra-cellulaire (MEC). En inhibant la plasmine, le TFPI-2 peut limiter l’activation des métalloprotéases matricielles (MMP), responsables de la dégradation de la MEC, et ainsi réduire l’invasion tumorale. Le TFPI-2 est, en effet, faiblement synthétisé par les cellules tumorales, particulièrement invasives, et très exprimé dans les cellules peu invasives. Nous avons donc évalué l’impact de l’inactivation stable du TFPI- 2 sur l’invasion de cellules tumorales pulmonaires en mettant en œuvre une stratégie d’ARN interférence basée sur des micros ARN.

Méthodes : Le TFPI-2 a été inactive via l’expression de miRNA spécifiques dans des cellules humaines NCI-H460, issues d’un carcinome pulmonaire à grandes cellules. Plusieurs clones (1b et 2b) ont été retenus pour étudier l’impact de cette inhibition sur les fonctions des cellules NCI-H460. Parallèlement, l’effet de cette inhibition sur les interactions cellules tumorales/fibroblastes du stroma a été étudié. L’expression transcriptionnelle des gènes du TFPI-2, des MMP-1, -2, - 3, -7, -9, -13, -14 et de l’EMMPRIN a été quantifiée par RT-PCR en temps réel, dans les clones et les cellules en coculture. Le potentiel invasif des cellules a été mesuré par migration à travers la membrane poreuse d’un insert nu ou recouvert de Matrigel, mimant la MEC. L’adhérence des cellules à différentes protéines de la MEC a également été évaluée et la prolifération cellulaire mesurée par un test MTT.

Résultats : Le pouvoir invasif des clones 1b et 2b, pour lesquels l’expression du TFPI-2 a été inactivée de plus de 90 %, est augmenté de 2 à 3 fois, ce qui pourrait être expliqué par une augmentation de l’adhérence des cellules aux protéines de la MEC, et notamment à la laminine et au collagène IV. De plus, nous avons montré que les clones 1b et 2b sur-expriment les MMP-1 et -3 et sous-expriment les MMP- 2 et -7. En revanche, le niveau d’expression du TFPI-2 n’a eu aucun effet sur la prolifération cellulaire. En condition de coculture, mettant en jeu des fibroblastes et des cellules tumorales, nous avons observé une potentialisation de l’expression transcriptionnelle des MMP-1, -3, -7 et –13 lorsque les cellules tumorales sont inactivées pour le TFPI-2.

Conclusions : Cette étude nous a permis de démontrer que le TFPI-2 a un impact sur les gènes impliqués dans le remodelage de la MEC et pourrait jouer un rôle inhibiteur de la protéolyse péricellulaire notamment lors des interactions cellules tumorales/ stroma. Ceci suggère un rôle inhibiteur important du TFPI-2 vis-à-vis de la progression tumorale expliquant l’agressivité des tumeurs l’exprimant faiblement.