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056 - Évaluation de la réponse proinflammatoire et angiogénique de cellules alvéolaires exposées à un extrait de fumée de cigarette - 05/12/08

Doi : RMR-11-2008-25-9-0761-8425-101019-200810921 

J. Aubert,

C. Le Quement,

I. Guenon,

V. Lagente,

E. Boichot

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Le processus angiogénique dans le développement tumoral est la résultante de l’activation de cellules tumorales, synthétisant le VEGF (« Vascular Endothelial Growth Factor »), de cellules inflammatoires du stroma tumoral synthétisant des métalloprotéinases, et de cellules endothéliales, cibles du VEGF. Notre étude a pour objectif général de mieux comprendre les mécanismes précoces impliqués dans les réponses proinflammatoire et angiogénique après une exposition de cellules de type alvéolaire à un extrait de fumée de cigarette.

Des cellules épithéliales (lignée A549) ou des macrophages (lignée U937 différenciée par du PMA pendant 72 heures) sont incubées pendant 24 heures avec différentes dilutions (1/10, 1/25, 1/50, 1/ 100 et 1/250) d’un extrait de fumée de cigarette (CSE) obtenu par la mise en contact de la fumée de 2 cigarettes 1R3 (Université Kentucky, USA) avec le milieu de culture. Les cellules U937, différenciées en macrophages, sont privées de PMA pendant 6 heures. Dans une autre série d’expériences, le surnageant des cellules U937 différenciées en macrophages et stimulées par le CSE, est collecté puis centrifugé. Cinq cents microlitres de surnageant sont déposés dans chacun des puits d’A549. Les productions d’interleukine-8 (IL-8), de VEGF sont mesurées par ELISA, de gelatinase B (MMP- 9) par zymographie et de metalloelastase (MMP-12) par western- Blot. Un dosage semi-quantitatif de marqueurs d’angiogenése a été effectué par des macropuces à protéines (Protein array, Ray-Biotech). Enfin, la mesure des ARNm est réalisée par PCR quantitative (Q-PCR) sybr green.

Une induction de l’expression des gènes codant pour l’IL-8, le VEGF et la MMP-12 est mise en évidence par les cellules U937 après exposition au CSE dilué au 1/25 et 1/50, ainsi qu’une libération accrue d’IL-8 et de VEGF dans le surnageant de culture. Nous n’avons pas observé d’augmentation de l’expression de gènes pour la MMP-9 ni de production par zymographie. Les cellules A549 ne sont pas activées par le CSE, mais elles le sont par le surnageant de culture des macrophages. Après une incubation de 24 heures avec ce surnageant, une induction de l’expression des gènes codant l’IL- 8 et le VEGF est mise en évidence.

Cette étude montre que l’activation de macrophage par le CSE entraîne la production de médiateurs inflammatoires comme l’IL-8 et de facteurs angiogéniques comme le VEGF Ces résultats suggèrent que le macrophage alvéolaire est la première cellule stimulée par la fumée de cigarette et la cellule épithéliale est activée secondairement par le macrophage.




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Vol 25 - N° 9

P. 1184 - novembre 2008 Retour au numéro
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