089 - Modulation du tonus des bronchioles humaines par l’acide 20-Hydroxy- éicosatétraénoïque et par les diacylglycérols - 05/12/08

Introduction : Les maladies bronchoconstrictrices sont associées à une perturbation du métabolisme de l’acide arachidonique (AA). Les cellules pulmonaires peuvent libérer l’AA sous forme d’acide gras libre ou sous forme conjuguée en diacylglycérol (DAG), à partir des phospholipides membranaires suite à l’action de phospholipases (i. e PLA₂, PLC). Les éicosanoïdes tels que le 20-HETE, produit par la CYP-450 ω-hydroxylase à partir de l’AA, de l’AA, sont connus pour moduler la contractilité des muscles lisses des voies respiratoires. Les mécanismes d’action des acides gras libres (20-HETE, AA) et de leurs conjugués (DAG-20-HETE, DAG-AA) sur les cellules musculaires lisses bronchiques (CML) humaines restent à être élucidés. Le but de cette étude est d’évaluer les effets du 20-HETE et ceux du DAG-AA, pour déterminer si ces molécules exercent des effets différentiels sur le tonus bronchique.

Méthodes : Les bronches humaines distales issues de patients entrant en chirurgie pour carcinome pulmonaire, ont été prélevées dans la partie saine du poumon et montées fraîchement ou après 1 à 3 jours de culture dans des bains d’organe isolé pour des mesures de tension isométrique. Des cultures de CML ont été réalisées à partir des tissus et utilisées soit en patch clamp (configuration cellule entière) pour mesurer les courants macroscopiques de type BK_Ca, soit pour des mesures spectrofluorimétriques de fluidité membranaire (sonde DPH).

Résultats : Le 20-HETE et le DAG-AA relaxent les bronchioles humaines distales natives et en culture. L’effet relaxant du 20- HETE est sensible à l’ibériotoxine (IbTx), ce qui suggère l’implication des canaux BK_ca dans le contrôle de la relaxation. La technique de patch clamp montre qu’1 µm de 20-HETE active les courants BK_Ca qui sont bloqués par 50 nM d’IbTx. La relaxation induite par le 20-HETE (0,3 - 3 µm) ne serait pas reliée à un effet non spécifique, car il ne modifie pas la fluidité membranaire. Par contre, l’utilisation de méthyl-β-cyclodextrine (5 mM), un accepteur de cholestérol, démontre que l’intégrité des radeaux lipidiques est requise pour préserver les effets relaxants du 20-HETE ainsi que ceux du DAG-AA.

Conclusion : Le 20-HETE et le DAG-AA exercent des effets relaxants qui nécessiteraient une interaction avec des protéines effectrices résidant probablement dans les radeaux lipidiques intacts. Cependant, il serait pertinent de tester les effets et le mécanisme d’action du DAG-20-HETE.