Maturation de l’IL-1? par le polynucléaire neutrophile, au cours de l’infection par Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) - 21/12/15

L’IL-1β est une cytokine sécrétée par le polynucléaire neutrophile (PNN) qui est essentielle pour la résistance de l’hôte contre les pathogènes. Elle peut, cependant, avoir un rôle délétère en exacerbant l’inflammation au cours d’infections aiguës ou chroniques. En général, l’activation de l’inflammasome aboutit à l’autoactivation de la capsase-1, responsable de la maturation de la proIL-1β. Cette maturation est suspectée avoir lieu en présence des sérine protéases spécifiques du PNN (NSP) : élastase, cathépsine G et protéinase 3. La contribution relative de ces mécanismes de maturation de l’IL-1β par les PNN est encore mal connue.

Étudier les mécanismes de maturation de l’IL-1β en s’intéressant aux inflammasomes d’intérêts (Nlrp3 et Nlrc4) et aux NSP au cours de l’infection à P. aeruginosa. Notre objectif secondaire est de déterminer l’importance de deux facteurs de virulence du P. aeruginosa : flagelline et outer membrane porin F (OprF), dans la maturation de l’IL-β par les PNN en les comparant aux macrophages.

Nous avons utilisé des modèles murins de souris sauvages (WT) et déficientes (KO) dans les protéines caspase-1 et ASC essentielles au fonctionnement des inflammasomes. Les PNN sont recueillis à partir de la moelle osseuse ou à 4 h d’une injection intrapéritonéale (IP) de glycogène 15 %. Les macrophages sont recueillis à 72 h d’une injection IP de thioglycollate. Des cocultures bactériennes et cellulaires en présence de différentes souches de P. aeruginosa sont réalisées : deux souches sauvages PAK et H103 et leurs mutants isogéniques déficients en flagelline (fliC) et en OprF (H636) respectivement.

Dans les modèles murins KO en caspase-1 et en protéine ASC, les PNN infectés ne sécrètent pas d’IL-1β. Nous avons montré que chaque NSP purifiée peut, in vitro, cliver une proforme recombinante d’IL-1β, et générer une protéine de 17 kDa pouvant correspondre à la forme mature d’IL-1β. Nous démontrons que la flagelline est impliquée dans la maturation de l’IL-1β notamment via la voie de l’inflammasome Nlrc4. Enfin, nous avons mis en évidence l’implication d’OprF dans la maturation de l’IL-1β via l’inflammasome Nlrp3.

Les inflammasomes sont nécessaires à la maturation de l’IL-1β par les PNN. Les NSP peuvent cliver, in vitro, la proIL-1β en forme mature. Des études in vivo pour corroborer ces résultats sont en cours. Enfin, la flagelline et OprF sont impliquées dans la maturation de l’IL-1β par les PNN.