Mise en place d’une stratégie expérimentale pour l’étude de l’infection par le RVA et le RVC d’un modèle d’épithélium reconstitué en interface air–liquide - 17/02/23

L’asthme est une pathologie respiratoire chronique et fréquente affectant aussi bien les enfants que les adultes. Dans sa forme sévère, l’asthme est caractérisé notamment par des exacerbations, le plus souvent dues à une infection par un rhinovirus. Selon plusieurs études épidémiologiques, le rôle du rhinovirus A (RVA) et C (RVC) dans les exacerbations est différent entre les enfants et les adultes. En effet, le RVA est majoritairement responsable des exacerbations de l’asthme chez l’adulte alors que le RVC est plus largement impliqué dans les exacerbations les plus sévères de l’enfant. Cette spécificité liée à l’âge suggère une modification physiopathologique de l’épithélium bronchique d’enfants par rapport à celui de l’adulte. Cependant, l’étude de l’infection épithéliale par le RVA et le RVC se heurte à des difficultés techniques, notamment au niveau de la production des particules de RVC infectieuses, mais aussi dans la visualisation de l’infection par le rhinovirus dans un modèle d’épithélium différencié en interface air–liquide. Ainsi, l’objectif de cette étude est de développer un modèle d’étude in vitro d’infection par le rhinovirus A et C dans un modèle d’épithélium permettant l’étude de la cinétique d’infection des épithéliums d’adultes et d’enfants.

Les particules de RVC ont été produites par génétique inverse à partir d’un plasmide contenant l’ADNc viral puis transfectées dans des cellules Hela. Selon le même processus, des particules de RVA et RVC couplées à un « Tag » GFP ont été produites. Après une infection d’épithéliums (MOI : 0,1), la cinétique d’infection a été observée par immunocytochimie pour les particules non couplées ou par vidéo-microscopie pour les particules possédant un « Tag » GFP. Enfin, la production apicale de RVA et RVC a été analysée par RT-PCR.

Les résultats montrent que la technique de génétique inverse permet la production de particules de RVC infectieuses. L’étude de la cinétique d’infection montre une réplication du RVA et du RVC dans notre modèle épithélial et peut être analysée par RT-PCR, immunocytochimie et vidéo-microscopie.

En conclusion, ce travail a permis la mise au point d’outils permettant de suivre l’infection par le RVA et le RVC dans un modèle d’épithélium bronchique reconstitué en interface air–liquide. Ces nouveaux outils nous permettrons d’étudier la cinétique d’infection par le RVA et le RVC des épithéliums d’adultes et d’enfants.