Impact de l’activation de la GTPase Rac dans la maturation et les fonctions de l’éosinophile dans l’asthme sévère - 17/02/23

L’asthme est une pathologie bronchique caractérisée par une hyperréactivité bronchique, un remodelage tissulaire et une inflammation chronique. Nos travaux ont montré que la GTPase Rac était activée au sein des polynucléaires éosinophiles dans le cadre d’un modèle murin d’asthme allergique sévère aux acariens. Notre objectif a été d’évaluer le rôle joué par Rac dans la maturation et les mécanismes de dégranulation des polynucléaires éosinophiles.

La différenciation des cellules médullaires osseuses murines en polynucléaires éosinophiles a été réalisée selon le protocole suivant : 3 jours de supplémentation en stem cell factor (100ng/mL) et en ligand de tyrosine kinase 3 de type FMS (100ng/mL) suivis de 11 jours de stimulation par l’interleukine 5 (10ng/mL) [1Dyer K.D., Moser J.M., Czapiga M., Siegel S.J., Percopo C.M., Rosenberg H.F. Functionally competent eosinophils differentiated ex vivo in high purity from normal mouse bone marrow J Immunol 2008 ;  181 : 4004-4009 [cross-ref]

Haga clic aquí para ir a la sección de Referencias]. Les niveaux de Rac-GTP ont été évalués au cours de la maturation par cytométrie en flux et par western blot. Sur le plan fonctionnel, des épreuves de dégranulation in vitro induite par le platelet activating factor (PAF) ont été mises en place avec mesure de l’activation de Rac et étude de l’impact de son inhibition pharmacologique.

La pureté des polynucléaires éosinophiles en fin de différenciation in vitro était en moyenne de 95 %. Une élévation significative des niveaux de Rac-GTP issus des lysats cellulaires totaux a été observée durant la différenciation (j1 1 vs j11 25,5±7,5, p=0,008). Cette élévation concernait principalement les polynucléaires éosinophiles tels qu’identifiés par cytométrie en flux (j1 628,6±4,5UI vs j11 779,8±0,5UI, p=2,2×10⁻¹⁶). L’inhibition pharmacologique de l’activation de Rac par l’A41 (10-5M) entraîne une tendance à la réduction de l’activité peroxidase totale relarguée dans le surnageant, reflet de la dégranulation induite par le PAF (CTL 1 vs inhibiteur Rac 0,68±0,23, p=0,06).

Nos résultats montrent que Rac s’active dans les polynucléaires éosinophiles au cours de leur maturation. Par ailleurs, l’activation de Rac joue un rôle significatif dans les mécanismes de dégranulation de l’éosinophiles matures. L’identification des régulateurs de l’activation de Rac ainsi que les principaux effecteurs impliqués dans ces fonctions pourraient améliorer nos connaissances relatives aux fonctions de l’éosinophile au cours de l’asthme.