Visualisation des structures épithéliales dans la FPI en microscopie 3D - 20/03/24

La fibrose pulmonaire idiopathique (FPI) est caractérisée par un profond remodelage du parenchyme pulmonaire. Parmi les multiples lésions typiques de la pathologie, on observe des structures épithéliales anormales sous forme de zones de bronchiolisation, exprimant des marqueurs bronchiques, et de kystes de pneumocytes de type 2 (P2). La relation potentielle entre ces structures est actuellement méconnue et les coupes histologiques offrent des possibilités limitées pour l’évaluation d’une éventuelle continuité. La microscopie fluorescente à feuillet de lumière (LSFM) permet une visualisation sans précédent du tissu pulmonaire en trois dimensions (3D), ce qui ouvre de nouveaux horizons pour explorer l’architecture du parenchyme fibreux.

Au total, 5 cryobiopsies trans-bronchiques de patients FPI, 5 échantillons d’explants de patients FPI (région sous-pleurale) et 5 échantillons de poumons donneurs (région sous-pleurale) ont été observés en microscopie à feuillet de lumière. Les échantillons ont été immunomarqués pour identifier les cellules basales des zones de bronchiolisation (kératine 5+) et les P2 (proSP-C+). Les tissus ont été déshydratés dans des bains de solvant selon la méthode 3DISCO [1 Mol Syst Biol 2021 ;  17 : e9807

Haga clic aquí para ir a la sección de Referencias] et immergés dans le cinnamate d’éthyle pour la transparisation. Les images ont été acquises dans le cinnamate d’éthyle à l’aide d’un microscope à feuillet de lumière et traitées avec le programme Oxford IMARIS.

Dans les tissus contrôles, on observe les P2 au niveau alvéolaire et les cellules basales dans les bronches et bronchioles, comme attendu. En comparaison, on observe la présence ectopique de kystes de P2 (rouge) et de zones de bronchiolisation (rose) dans le tissu pulmonaire fibreux (Fig. 1). Contrairement à nos attentes, nous avons observé des connections entre différents kystes de P2 ainsi qu’entre certains kystes et des zones de bronchiolisation.

Les kystes de P2 et zones de bronchiolisation ne sont pas des structures discrètes mais forment un réseau continu dans le tissu pulmonaire fibreux.