Inhibition de la protéine Gp96 comme stratégie anti-fibrotique dans la fibrose pulmonaire idiopathique et son suivi par imagerie in vivo de la protéine FAP - 17/02/23

La fibrose pulmonaire idiopathique (FPI) est une maladie évolutive caractérisée par une production et un dépôt excessif de matrice extracellulaire (MEC) dans les poumons entraînant une insuffisance respiratoire chez le patient. Sous l’influence de cytokines pro-fibrotiques telles que le TGF-β1, les cellules pulmonaires vont acquérir un phénotype myofibroblastique qui exprime la Fibroblast Activation Protein (FAP) et joue un rôle important dans le dépôt de MEC. Les options de traitement de la FPI sont limitées et ne peuvent que retarder la progression de la maladie sans l’arrêter. Gp96 est une protéine chaperonne nécessaire à l’expression membranaire de nombreux récepteurs et surexprimée au cours de la fibrose. L’inhibition de Gp96 peut être intéressante dans l’IPF et nous émettons l’hypothèse que l’imagerie in vivo de myofibroblastes via FAP pourrait permettre de suivre l’efficacité de cette thérapie.

Des souris C57BL/6 âgées de huit semaines ont reçu une administration unique intratrachéale de bléomycine (BLM, 1,5mg/kg, n=6) pour induire une fibrose pulmonaire ou de Nacl (n=6) comme contrôle. L’expression de la protéine FAP a été détecté par sur du tissu pulmonaire de ce modèle. L’expression de la protéine FAP a également été détecté par western blot dans des cellules A549 (cellule épithéliale) incubée avec du TGF-β1 (2ng/mL pendant 24h) et traité ou non avec un inhibiteur de Gp96 le PU-WS13 (50μM pendant 24h). Un essai de ligature de proximité (PLA) a été utilisé pour étudier les interactions protéine-protéine entre Gp96 et FAP sur des cellules A549 traitée avec TGF-β1 et PU-WS13. Une sonde d’imagerie spécifique de FAP a été mise au point à partir d’un fragment d’anticorps commercial couplé à un agent chélateur (DOTAGA) pour le radiomarquage à l’indium-111 pour l’imagerie par tomographie par émission monophotonique (SPECT). La sonde 111In-DOTAGA-Fab-FAP a été injectée par voie intraveineuse à des souris C57BL/6 (100μL, 10MBq, 25μg). Les souris ont subi une imagerie SPECT à 1h, 4h et 24h après l’injection.

Nos Résultats ont démontré une forte expression de la protéine FAP dans le poumon de souris fibrose. L’inhibition de Gp96 induit une diminution de l’expression protéique de FAP et, de plus, l’essai de PLA a aussi démontré une proximité entre Gp96 et FAP dans le cytoplasme, réduit par le PU-WS13. L’imagerie SPECT a montré une accumulation statistiquement plus élevée de la sonde 111Indium-Fab-FAP dans les poumons des souris fibreuses que chez les animaux témoins.

L’inhibition de Gp96 représente une stratégie anti-fibrotique innovante. L’imagerie in vivo des myofibroblastes via la protéine FAP semble capable de suivre l’efficacité de cette thérapie dans notre modèle IPF.