Caractérisation des profils de macrophages pulmonaires dans un modèle porcin de choc septique - 20/03/24

La transposition des agents immunothérapeutiques mis au point chez la souris à des essais cliniques chez l’Homme se traduit par de nombreux échecs pour le sepsis sévère et le choc septique, soulignant l’intérêt de recourir à des modèles animaux complémentaires. Ces dernières années, une utilisation croissante de modèles porcins est observée due à l’appréciation des similitudes physiologiques, métaboliques et immunologiques avec l’homme. Un exemple de ces similarités immunologiques concerne les macrophages, acteurs clés dans la physiopathologie de nombreuses maladies, dont le sepsis chez l’homme et chez les animaux. Comme dans tout type d’infection, les macrophages régulent la réponse immunitaire de l’hôte par leur polarisation vers différents phénotypes fonctionnels (M1 et M2), et le dysfonctionnement de cette réponse immunitaire est l’un des mécanismes qui sous-tendent l’apparition et le développement du sepsis. Étudier l’évolution des phénotypes des macrophages lors du choc septique pourraient contribuer à améliorer la compréhension des mécanismes inflammatoires mis en jeu et du concept d’immunoparalysie. Le profil et les caractéristiques des macrophages tissulaires pulmonaires sont bien connus chez l’homme et chez le rongeur, mais peu connus chez le porc. L’objectif de cette étude est de caractériser les sous-types de macrophages M1 et M2 porcins au sein des tissus pulmonaires à la suite de l’induction d’un choc septique.

Huit porcs (Sus scrofa domesticus), 25 à 40kg ont été anesthésiés et une septicémie a ensuite été induite par inoculation intraveineuse de Pseudomonas aeruginosa (5×108 CFU/mL perfusé à 0,3mL/20kg/min) jusqu’à l’induction du choc (PAM<40mmHg). Après, les animaux ont été réanimés par un bolus de norépinéphrine (0,05μg/kg/min) et suivis pendant 2heures. Les modifications histologiques et le profil spécifique des macrophages M1 et M2 ont été étudié vie l’expression de CD₁₄, CD₈₆, CD₂₀₆ et CD₁₆₃, par immunohistochimie. Le t-test ou Wilcoxon-Mann-Whitney a été réalisé.

Les analyses histologiques ont révélé de nombreuses zones d’œdème intra-alvéolaire, une forte densité cellulaire ainsi qu’un infiltrat inflammatoire dans les poumons de porcs soumis à un choc septique. Le marquage avec l’anticorps anti-CD₆₈ et CD₈₆ humain pour les marquages de macrophages tissulaires et le macrophage M1 semble être non spécifique dans les tissus pulmonaires porcins. À l’inverse, ces marquages sur le tissu pulmonaire humain sont plus sensibles et spécifiques. L’utilisation de l’anticorps anti-C206 et anti-CD₁₆₃ sur les échantillons pulmonaires porcins permet de réaliser un marquage de macrophages spécifiques. Nous avons pu également mettre en évidence une augmentation du nombre de macrophages marqués CD₁₆₃+mais pas CD₂₀₆+chez le groupe soumis au choc septique par rapport au groupe contrôle. Pour la suite, nous avons réalisé un co-marquage de CD₁₆₃+CD₁₄+afin de différencier les macrophages issus de monocytes de macrophages tissulaires, cette quantification est en cours.

Les marqueurs de macrophages M2 ont bien été validés pour les tissus pulmonaires chez le porc, en revanche, d’autres marqueurs M1 plus spécifiques restent à mettre en place.