Caractérisation de l’activité antifongique du peptide antimicrobien ETD151 vis-à-vis d’Aspergillus fumigatus - 20/03/24

La colonisation bronchique par les pathogènes fongiques, notamment par Aspergillus fumigatus (Af), est associée à une diminution des performances respiratoires des patients atteints de mucoviscidose. Elle constitue le point de départ de complications allergiques au cours de la pathologie. L’arsenal antifongique reste très limité et l’émergence récente de souches d’Aspergillus fumigatus résistantes aux azolés est préoccupante. Dans ce contexte, les peptides antimicrobiens (PAM) apparaissent comme une approche thérapeutique prometteuse et une alternative aux antifongiques conventionnels. ETD₁₅₁, un PAM dérivé d’un insecte, a été identifié comme étant très actif sur un champignon filamenteux phytopathogène (Botrytis cinerea). Notre objectif est de déterminer l’activité antifongique de ETD₁₅₁ contre Af.

L’effet de ETD₁₅₁ a été étudié sur les différents morphotypes (spores, spores germées et filaments) de souches cliniques d’Af sensibles et résistantes aux azolés et sur les souches de références Af293 et DAL. L’impact de ETD₁₅₁ sur la morphologie et sur la viabilité des souches d’Af a été estimé, respectivement, par microscopie et par un test cinétique de mesure de l’activité métabolique à la résazurine. L’activité fongicide de ETD₁₅₁ a été confirmée par coloration du champignon avec un intercalant de l’ADN (Sytox-green). La recherche de la cible fongique de ETD₁₅₁ a été réalisée par un test de compétition avec des glucosylcéramides. L’activation des cellules épithéliales bronchiques (CEB) (lignée Beas-2B) par ETD₁₅₁ a été étudiée par mesure de la synthèse d’IL-8 et IL-10 (ELISA) et la cytotoxicité de ETD₁₅₁ par dosage de la lactate déshydrogénase (LDH).

ETD₁₅₁ altère la morphologie des spores germées et des filaments d’A. fumigatus. Ces morphotypes traités par ETD₁₅₁ montrent des filaments courts, très ramifiés avec un relargage du contenu cytoplasmique au niveau des apex (Fig. 1). Le test de viabilité cellulaire à la résazurine nous a permis de mettre en évidence une inhibition concentration dépendante de l’activité métabolique du champignon. Cependant, nous n’observons pas d’inhibition totale aux concentrations utilisées. L’utilisation du Sytox-green nous a permis de confirmer cet effet partiellement fongicide du peptide sur les spores germées et les filaments. De plus, l’ensemble de ces résultats laisse suggérer une meilleure activité fongicide de ETD₁₅₁sur les souches résistantes aux azolés par rapport aux souches sensibles. Les études de compétition avec les glucosylcéramides nous ont permis de confirmer le rôle majeur de ces sucres, qui sont des composants de la paroi fongique, dans l’interaction de ETD₁₅₁ avec Af. La stimulation des CBE avec ETD₁₅₁ n’a pas conduit à la libération de LDH, ni à la synthèse d’IL-8 ou d’IL-10.

Les résultats obtenus sont très encourageants quant à l’effet antifongique de ETD₁₅₁. Une analyse transcriptomique du champignon, traité ou non par ce peptide à différents temps, est en cours et devrait permettre de mieux comprendre l’impact du peptide sur le champignon. Il sera important également de vérifier que le champignon n’acquière pas de résistance vis-à-vis de ce peptide.